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液相色譜儀(HPLC)是分析實(shí)驗室常用的測試儀器之一,其應用越來(lái)越廣泛。此種儀器在使用過(guò)程中,難免會(huì )出現各種各樣的問(wèn)題,并將直接影響到所測數據的準確性和儀器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因,即可清楚預防和排除這些故障的方法,就可正確地使用儀器并zui大限度地發(fā)揮儀器的性能。今天我們要從以下幾個(gè)方面和您分享下在使用液相色譜儀中需注意的幾個(gè)問(wèn)題。
液相色譜儀使用注意事項
流動(dòng)相必須用HPLC級的試劑,使用前過(guò)濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45um或更細的膜過(guò)濾)。
流動(dòng)相過(guò)濾后要用超聲波脫氣,脫氣后應該恢復到室溫后使用。
不能用純乙腈作為流動(dòng)相,這樣會(huì )使單向閥粘住而導致泵不進(jìn)液。
使用緩沖溶液時(shí),做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時(shí),然 后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,以充分洗去離子。對于柱塞桿外部,做完樣品后也必須用去離子水沖洗20ml以上。
長(cháng)時(shí)間不用儀器,應該將柱子取下用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應該用有機相(如甲醇等),因為純水易長(cháng)霉。
每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。
C18柱不能進(jìn)蛋白樣品,血樣、生物樣品。
堵塞導致壓力太大,按預柱→混合器中的過(guò)濾器→管路過(guò)濾器→單向閥檢查并清洗。清洗方法;①以異丙醇作溶劑沖洗:②放在異丙醇中間用超聲波清洗;⑧用10%稀硝酸清洗。
氣泡會(huì )致使壓力不穩,重現性差,所以在使用過(guò)程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。
如果進(jìn)液管內不進(jìn)液體時(shí),要使用注射器吸液:通常在輸液前要進(jìn)行流動(dòng)相的清洗。
要注意柱子的pH值范圍,不得注射強酸強堿的樣品,特別是堿性樣品。
更換流動(dòng)相時(shí)應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動(dòng)邊靖洗,然后插入新的流動(dòng)相中。更換無(wú)互溶性的流動(dòng)相時(shí)要用異丙醇過(guò)渡一下。